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通用細(xì)胞凍存液操作步驟以及注意事項(xiàng)

發(fā)布日期: 2019-03-22
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通用細(xì)胞凍存液操作步驟以及注意事項(xiàng)

 

       隨著實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)的發(fā)展,除了原代培養(yǎng)之外,人工開發(fā)出來的細(xì)胞系的保存越來越重要。冷凍保存細(xì)胞系的優(yōu)點(diǎn)如下:1、減少基因漂移;2、減緩細(xì)胞系的衰老;3、穩(wěn)定表型;4、減少微生物污染及交叉污染機(jī)會(huì)等。細(xì)胞冷凍的原理在于盡可能降低細(xì)胞內(nèi)的晶體形成,減少細(xì)胞內(nèi)水凝固所形成的高濃度溶質(zhì)對(duì)細(xì)胞造成的低溫?fù)p傷,從提高細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)的存活率。細(xì)胞凍存的數(shù)量應(yīng)保證復(fù)蘇時(shí)低溫保護(hù)劑獲稀釋,稀釋后的細(xì)胞濃度扔高于正常傳代的細(xì)胞濃度為宜,這是因?yàn)楫?dāng)?shù)蜏乇Wo(hù)劑稀釋以后,該濃度一般不會(huì)對(duì)細(xì)胞造成毒性損傷。

     Leagene 通用細(xì)胞凍存液主要由FBS、DMSO等組成,是非常經(jīng)典的一種無菌凍存液。用于各種哺乳動(dòng)物原代細(xì)胞、傳代細(xì)胞系、雜交瘤細(xì)胞等的凍存。

自備材料:

1、 細(xì)胞計(jì)數(shù)器 2、 細(xì)胞凍存管 3、 超低溫冰箱或液氮 4、 超凈工作臺(tái)

操作步驟:

1、培養(yǎng)細(xì)胞至對(duì)數(shù)生長晚起,顯微鏡觀察其外觀、形態(tài)、有無污染等,取狀態(tài)良好的細(xì)胞進(jìn)行凍存操作。如為貼壁生長細(xì)胞,用胰蛋白酶消化并用*培養(yǎng)基終止消化,進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù);如為懸浮生長細(xì)胞,進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

2、離心,棄上清

3、加入適量的通用細(xì)胞凍存液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到、ml,置于凍存管中,密封,不要擰的太緊,避免彎曲變形。

4、一般進(jìn)行凍存。亦可采用-20℃30min,-70℃過夜,后置于液氮罐中長期存儲(chǔ)。

注意事項(xiàng):

1、注意在超凈工作臺(tái)內(nèi)無菌操作,盡量避免污染。

2、初次使用融化后可在4℃保存1個(gè)月,單應(yīng)減少反復(fù)凍融的次數(shù),以免失效。

3、雜交瘤細(xì)胞凍存時(shí)應(yīng)定期復(fù)蘇,檢查細(xì)胞的活性和分泌抗體的穩(wěn)定性。

4、為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作

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