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GIBCO胰酶的具體配置方法

發(fā)布日期: 2023-02-06
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   GIBCO胰酶主要含胰蛋白酶、胰淀粉酶和胰脂肪酶等,胰蛋白酶能使蛋白轉化為蛋白胨,胰淀粉酶使淀粉轉化為糊精與糖,胰脂肪酶則使脂肪分解為甘油和脂肪酸。GIBCO胰酶的具體配置方法:
 
  1、培養(yǎng)液配制,方便好用,對細胞影響小,并且培養(yǎng)液的ph值正好適合胰蛋白酶的溶解
 
  2、生理鹽水配制,要先調ph值7.2到7.4(①胰酶(1:250)2.5克②EDTA-Na0.3克③NaCl8.0克④KCl0.4克⑤Glucose1.0克⑥PhenolRed0.005克⑦Water1000mL磁力攪拌2-3小時,調pH7.8-8.0,過濾除菌。)
 
  3、pbs(0.1%胰酶溶液的配制:稱取胰酶粉末0.1g,先用少許滅菌過的PBS調成糊狀,然后補足到100ml。置室溫攪拌4小時或冰箱內過夜,過濾滅菌,分裝,4℃保存?zhèn)溆?。?或是hanks或是D-hanks液配制(1.稱取胰蛋白酶粉末置燒杯中,先用少許D-Hanks平衡鹽溶液(pH7.2左右)調成糊狀,然后再補足D-Hanks平衡鹽溶液,攪拌混勻,置室溫4小時或冰箱過夜,并不斷攪拌振蕩;2.次日,先用濾紙粗濾,再進行過濾除菌,分裝入瓶中,低溫冰箱保存?zhèn)溆?,常用濃度?.25%或0.125%。胰蛋白酶溶液偏酸,使用前可調用碳酸氫鈉溶液調pH至7.2左右。)
 
  一般0.45微米的一次性濾器過濾除菌,至于作用效果,需要消化一次細胞感覺一下,因為不同廠家的酶不一樣,有的作用溫和,有的作用劇烈。
 
  4、是否需要四度放置過夜,取決于你的胰酶的純度。過去的胰酶純度不高,所以難以溶解,需要四度過夜.而現(xiàn)在的胰酶純度都很高,就沒有必要四度過夜。從理論上來說,四度放置過夜,給細菌生長的機會,盡管過濾可以出去細菌,可是出不掉其代謝產物。
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