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賽默飛熱循環(huán)儀特點(diǎn)

發(fā)布日期: 2024-05-21
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  Thermo Fisher Scientific(賽默飛)的熱循環(huán)儀是一種用于進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備。以下是使用Thermo Fisher熱循環(huán)儀的具體方法和注意事項(xiàng)。

  主要步驟

  1. 準(zhǔn)備PCR反應(yīng)混合物

  在無(wú)菌環(huán)境中將以下試劑按照PCR反應(yīng)體系的要求混合在PCR管中:

  模板DNA

  正向引物和反向引物

  dNTPs(脫氧核苷三磷酸)

  PCR緩沖液

  MgCl2(如果緩沖液中不包含)

  Taq DNA聚合酶或其他熱穩(wěn)定DNA聚合酶

  無(wú)菌水

  2. 設(shè)置PCR儀參數(shù)

  根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求設(shè)置PCR儀的參數(shù),包括:

  初始變性:95℃,2-5分鐘

  循環(huán)參數(shù)(通常30-40個(gè)循環(huán)):

  變性:95℃,30秒

  退火:50-65℃,30秒(根據(jù)引物的Tm值調(diào)整)

  延伸:72℃,30秒-1分鐘(根據(jù)擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度調(diào)整,每1000 bp需1分鐘)

  最終延伸:72℃,5-10分鐘

  保溫:4℃

  3. 加載PCR反應(yīng)管

  將準(zhǔn)備好的PCR反應(yīng)管放入熱循環(huán)儀的模塊中,確保每個(gè)反應(yīng)管都放置牢固,避免接觸不良。

  4. 啟動(dòng)熱循環(huán)儀

  選擇預(yù)設(shè)的程序或手動(dòng)輸入上述設(shè)置,啟動(dòng)PCR反應(yīng)。

  5. 監(jiān)控和完成反應(yīng)

  在PCR反應(yīng)進(jìn)行過(guò)程中,監(jiān)控儀器運(yùn)行情況。反應(yīng)完成后,熱循環(huán)儀會(huì)自動(dòng)降溫到保溫溫度(通常為4℃)。

  6. 分析PCR產(chǎn)物

  反應(yīng)完成后,通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳等方法進(jìn)行PCR產(chǎn)物分析。

  熱循環(huán)儀的型號(hào)

  Thermo Fisher提供多種型號(hào)的熱循環(huán)儀,常見的有:

  Applied Biosystems™ SimpliAmp™ Thermal Cycler

  Applied Biosystems™ Veriti™ Thermal Cycler

  Applied Biosystems™ ProFlex™ PCR System

  使用注意事項(xiàng)

  無(wú)菌操作:確保無(wú)菌環(huán)境,避免污染。

  合理設(shè)置參數(shù):根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求優(yōu)化退火溫度和循環(huán)次數(shù)。

  試劑質(zhì)量:使用高質(zhì)量試劑,確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。

  設(shè)備維護(hù):定期校準(zhǔn)和維護(hù)熱循環(huán)儀,確保其正常運(yùn)行。

  通過(guò)以上步驟,你可以有效地使用Thermo Fisher熱循環(huán)儀進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)。每個(gè)型號(hào)的具體操作界面和功能可能略有不同,建議參閱設(shè)備的操作手冊(cè)以獲取詳細(xì)信息和指導(dǎo)。


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